Şüpheli İmmün Yetmezlik Hastalıkları İçin Farklı Klinik Araştırmalar ve Tedaviler
Şüpheli İmmün Yetmezlik Hastalıklarında Farklı Klinik Araştırmalar ve Tedaviler!
Genç bebeklerde lenfosit sayılarının (lenfopeni) azalması, immün yetmezlik için derhal soruşturma yapılmasını garanti eder.
Normal yenidoğanlarda ve küçük bebeklerde lenfosit sayıları büyük çocuklara ve yetişkinlere göre daha yüksektir. Bununla birlikte, bebeklerde ve küçük çocuklarda normal veya artan sayıda lenfosit, primer immün yetmezlik hastalıkları olasılığını dışlamaz, çünkü tüm hastalara karşı graft-konakçı (GVH) reaksiyonu belirgin olmayabilir.
A. Şüpheli bir bağışıklık yetersizliği olan hastanın değerlendirilmesi aşağıdaki incelemelerle başlar:
ben. Hemoglobin, Ortalama hücre hemoglobin (MCH), Ortalama hücre hemoglobin konsantrasyonu (MCHC)
ii. RBC'ler numarası. Hematokrit (HCT), Ortalama hücre hacmi (MCV), retikülosit sayısı.
iii. Toplam WBC sayısı. Total lenfosit sayısı: Timik hipoplazisi olan SCID hastalarının çoğunda, devamlı olarak düşük lenfosit sayısı vardır. Ancak normal bir lenfosit sayısı, SCID'yi dışlamaz. Ayrıca, lenfopeni viral enfeksiyonlara, yetersiz beslenmeye, hücre kaybına, otoimmün hastalıklara ve miyelopatilere ikincil olabilir.
iv. Diferansiyel lökosit sayısı (Nötrofiller, lenfositler, eozinofiller, bazofiller ve monosit yüzdeleri)
v. Mutlak nötrofil, bazofil, eozinofil, monosit ve lenfosit sayısı.
vi. Eritrosit sedimantasyon hızı (ESR)
vii. Trombosit sayımı
viii. Serum sodyum, potasyum, kalsiyum, klorür ve glukoz seviyeleri.
ix. Periferik kan yayma çalışması
İmmünolojik yeterliliğin ileri değerlendirmesi aşağıdaki araştırmalarla yapılabilir.
B. İmmünoglobulinler ve Antikorlar:
İmmünoglobulinlerin Serum Seviyeleri:
Serum IgG, IgM, IgA, IgE ve IgD seviyeleri, radyal immünodifüzyon, otomatik immünoturbidometri, radyo-immünoassay veya ELISA teknikleri kullanılarak kantitatif olarak ölçülür. Serum immünoglobulin konsantrasyonları yaşa ve çevreye göre değişir. Bu nedenle uygun bölgesel ve etnik yaşla ilgili ve cinsiyetle ilgili normlar kullanılmalıdır.
İmmünoglobulin konsantrasyonları primer immün yetmezlik tanısı için tek kriter olarak kullanılamaz. Düşük seviyelerde immünoglobülinler de sentezdeki azalmaya veya immünoglobülinlerin kaybına bağlı olabilir. Genellikle eşzamanlı olarak kaybedilen (örn. Gastrointestinal veya böbrek yolları yoluyla) serum albümini ölçülerek dolaylı bir kayıp göstergesi elde edilebilir.
İmmünoglobulin alt sınıfları için normal değerler mevcuttur. Ancak normal çocuklarda aralıklar çok geniştir ve genetik ve coğrafi varyasyonlardan etkilenir.
İmmünoelektroforez ve immünofiksasyon, M bileşenlerinin tespitinde faydalıdır.
Kan grubu A ve B antijenlerine karşı doğal antikorlar:
Kan grubu A ve B antijenlerine karşı doğal antikorlar, bazen hastanın karbonhidrat antijenlerine karşı IgM antikorları üretme yeteneğinin bir ölçüsü olarak araştırılır.
Bağışıklama Sonrası Spesifik Antikor Üretimi:
İmmünizasyonları takip eden çocuklarda normal IgG antikorları aralıkları mevcuttur. Ancak dikkatli bir yorum gereklidir.
Primer immün yetmezlikten şüphelenildiğinde canlı aşılar (oral çocuk felci aşısı, BCG, kızamık, kızamıkçık ve kabakulak gibi) asla kullanılmamalıdır. Canlı aşılar ayrıca diğer aile üyelerine de verilmemelidir.
ben. Aşılanmamış çocuk:
a. Difteri / tetanoz (DT) veya Hib (Haemophilus influenzae tip b) konjugat aşıları hastaya önerilen dozlarda verilebilir. Son immünizasyondan 3 hafta sonra kan alınır ve enjekte edilen antijenlere karşı IgG antikorları ELISA tekniği ile ölçülür.
Difteri antikorları için bir Schick testi yapılabilir.
b. Üç doz öldürülmüş poliomyelit aşısı (2 haftalık aralıklarla kas içine 1.0 ml) de kullanılabilir. Son enjeksiyondan iki hafta sonra kan, virüs nötralizasyon yöntemiyle spesifik antikorlar için kontrol edilir.
ii. DPT veya DT veya Hib konjugat aşısı ile aşılanmış çocuk:
a. Difteri, tetanoz, pertusis ve Haemophilus influenzae tip b'ye karşı serum IgG antikorları ölçülür. Antikor titreleri düşükse, bir güçlendirici enjeksiyon yapılır ve daha sonra antikor seviyeleri ölçülür.
Aynı zamanda difteri antikorlarını tespit etmek için Schick testi de yapılabilir.
Kullanılabilecek Ek Aktif Bağışıklamalar:
ben. IgG antikoru tamamen karbonhidrat antijenlerine tepki verir:
Pneumococcus polisakarit / meningococcus polisakarit / Haemophilus influenza tip b polisakarit (taşıyıcı protein içermeyen) / tifoid VI antijenleri enjekte edilebilir ve enjeksiyondan 3 hafta sonra alınan kan örneklerinden serum IgG antikorları ölçülür. (Bu polisakkaritler ve diğer saf polisakarit antijenleri, 2 yaşın altındaki bebeklerde yararlı değildir. Ayrıca, 5 yaşından küçük çocuklarda sonuçların yorumlanması zordur, çünkü yanıtın geliştiği yaş 2-4 yıl arasındadır.)
ii. Hepatit A aşısı
iii. Hepatit B aşısı, immün yetmezliği test etmek için güvenilir bir antijen değildir. Zira popülasyonda, özellikle 40 yaşın üzerindeki hastalarda yüksek oranda yanıt vermeyenler vardır.
C. B lenfosit sayısı:
Floresan etiketli CD19 ve CD20 monoklonal antikorları kullanılarak yapılan akış sitometrisi, B hücrelerinin sayısını saymak için kullanılır. Tam kan filmindeki B hücrelerinin yüzdesini saymak için immünositolojik yöntem kullanılabilir.
Kemik iliği aspiratındaki ön-B hücreleri, C019 + hücrelerinde sitoplazmik u ağır zincirlerini saptamak için saflaştırılmış florokrom etiketli antikorlarla tanımlanır.
D. T lenfosit Numarası:
CD3'e flüoresan etiketli monoklonal antikorlar kullanan akış sitometresi, toplam T hücresi sayısını saymak için kullanılır. Floresan etiketli CD4 ve CDS monoklonal antikorları sırasıyla enumant yardımcı T hücreleri ve sitotoksik T hücreleri kullanılır.
Şüpheli hiper IgM immün yetmezliğinde, T hücreleri ilk önce PMA ve inomisin tarafından aktive edilir ve daha sonra yüzeylerinde CD40 ligandının (CD40L) ekspresyonu için analiz edilir.
Lenfositlerin in vitro stimülasyonu:
Lenfositler, aşağıdaki ajanlarla in vitro olarak aktive edilebilir:
ben. mitojenler:
Fitohemaglutinin (PHA), Pokeweed mitojen (PWM), Concanavalin (Con A).
ii. Antijenler:
PPD, Candida, streptokinaz, tetanoz toksoid ve difteri toksoid.
iii. Allojenik hücreler.
iv. CDS, CD2, CD28 ve CD43 gibi sinyal iletimi ile ilgili T hücresi yüzey moleküllerine karşı antikorlar.
Aktivasyondan sonra aktif lenfositler aşağıdaki yöntemlerle tespit edilebilir:
1. Aktivasyon mariclerinin ifadesinin tespiti:
Aktive T hücreleri, CD69, IL-2 reseptörü a (CD25), transferrin reseptörü (CD71) ve MHC sınıf II moleküllerini eksprese eder (istirahat T hücreleri sadece birkaç MHC sınıf II molekülü eksprese etmez veya eksprese etmez). T hücrelerinin bir mitojenle (PHA gibi) uyarılmasından 1-2 gün sonra, hücreler, CD25, CD71 veya MHC sınıf II moleküllerine flüoresan etiketli monoklonal antikorlar kullanılarak akış sitometresi ile incelenir.
2. Aktif T hücrelerinde biastojenik yanıtın tespiti:
Mononükleer hücreler bir mitojen ile uyarılır ve daha sonra 3 H veya 14 C işaretli timidin kültüre eklenir. 16-24 saat sonra hücreler çökeltilir ve hücrelere dahil edilen radyo nükleotit materyali miktarı, sıvı sintilasyon sayacında sayılır. Radyo nükleotid sayısı, T hücresi aktivasyonunun bir ölçüsü olarak kullanılır.
3. Karışık lenfosit reaksiyonu (MLC).
4. Aktive edilmiş T hücreleri tarafından salgılanan IL-2 miktarının belirlenmesi:
Periferik kan mononükleer hücreleri, bir in vitro hücre kültürü sisteminde bir mitojen ile uyarılır. Süpernatan sonra toplanır ve süpernatandaki IL-2 miktarı, ELISA yöntemi veya fare IL-2'ye bağlı kültürlenmiş T hücre çizgileri (örn. CTLL2) ile 3H-timidin alımı kullanılarak ölçülür.
F. Cilt Testi:
Kabakulak, trichophyton, saflaştırılmış protein türevi (PPD), Candida, tetanoz toksoid ve difteri toksoidi genellikle deride gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) reaksiyonu ortaya çıkarmak için kullanılan antijenlerdir. Arızalı CMI yanıtını değerlendirmek için birkaç antijenin test edilmesi gerekir. Her antijenin 0.1 ml'si intradermal enjekte edilir ve enjeksiyondan 48-72 saat sonra maksimum endürasyon çapı ölçülür.
Olumlu bir DTH yanıtı bilgilendiricidir. Ayrıca, DTH yanıtı yaş, steroid tedavisi, ağır hastalık ve son bağışıklamalardan etkilenir. Ancak, negatif DTH tepkilerinin yorumlanması zordur, (özellikle bebeklerde ve küçük çocuklarda), daha önce test edilen antijenlere maruz kalmamış (hassaslaştırılmış) olmayabilir.
G. NK Hücreleri:
CD16, CD56 ve CD57'ye karşı floresan etiketli monoklonal antikorlar, NK hücrelerinin sayısını saymak için bir akış sitometresinde kullanılır. NK hücresi fonksiyonel aktivitesi, K562 gibi hücre hatlarına karşı sitotoksisite tahlili ile değerlendirilebilir.
H. Toplam Hemolitik Tamamlayıcı:
Toplam hemolitik tamamlayıcı ve klasik ve alternatif tamamlayıcı yolakların ayrı ayrı tamamlayıcı bileşenleri.
I. Fagositik Fonksiyonlar:
ben. Nitro mavi tetrazolyum boya indirgeme testi
ii. PMA veya diklor-florin kullanılarak kan hücrelerinin uyarılmasından sonra O2 - radikal oluşumunun ölçümü.
iii. Fagositlerin stafilokok veya parakokobakilli yutma ve öldürme kapasitelerinin ölçülmesi.
iv. Enflamatuar yanıtın bütünlüğü, Rebuk deri penceresi tekniği ile test edilebilir.
v. Kemotaksisin, kemokinlerin ve seçilen enflamatuar sitokinlerin üretilmesi ve salınması kapasitesinin ölçülmesi.
vi. Yapışma moleküllerinin ekspresyonunun değerlendirilmesi (örneğin CD18).
J. Kemik İliği Aspirasyonu veya Kemik İliği Biyopsisi:
Plazma hücrelerinin ve B öncesi hücrelerin tanımlanmasında kemik iliği aspirasyonu kullanılır. Kemik iliği biyopsisi veya aspirasyonu, diğer hastalıkları dışlamak ve belirsiz enfeksiyonları teşhis etmek için de kullanılır.
K. Lenf Düğümü Biyopsisi:
Çoğu immün yetmezlik hastalığının tanısı için lenf bezi biyopsisi gerekli değildir. Ancak, yardımcı olabilir. Enfeksiyon, malignite veya foliküler hiperplazi bulmak için hızla genişleyen lenf düğümleri biyopsi ile alınmalıdır. Ancak, lenf nodu biyopsisi SCID hastalarında potansiyel olarak tehlikelidir, çünkü bunlar yavaş iyileşir ve hastaya mikropların girme portalı görevi görebilir.
L Rektal ve Bağırsak Biyopsisi:
Yaygın değişken immün yetmezliği ve selektif IgA eksikliği olan hastalarda plazma hücreleri ve lenfoid hücreler için rektal doku incelemeleri yararlı olabilir. Lenfoid hücreler, 15-20 günden fazla normal normal bebeklerde rektal ve bağırsak biyopsilerinde bulunur. Jejunal biyopsi villöz atrofi gösterebilir ve Giardia lamblia ve Cryptosporidium enfeksiyonlarını gösterebilir.
M. Cilt Biyopsisi:
Deri biyopsisi, kan transfüzyonu, kemik iliği nakli, fetal doku nakli sonrası immün yetmezlik hastalarında GVH reaksiyonu tanısı koymak için yararlıdır. Deri biyopsisi, hamilelik sırasında anneden fetüse uterodaki lenfositlerin transferine bağlı GVH reaksiyonunun belirlenmesinde de faydalıdır.
N. Thymus Biopsy:
Timus biyopsisi yalnızca timoma şüphesiyle yapılır.
Kimeriklik (Genetik olarak farklı iki hücre hattından birindeki oluşum):
Bir kişi başka bir genetik olarak farklı bir bireyden hücreler (WBC'ler) aldığında, alıcı genetik olarak farklı iki hücre tipine (alıcının kendisinin bir hücre tipi ve vericiden bir diğeri) sahiptir ve kimimerizm olarak adlandırılır. Hamilelik sırasında maternal lenfositler fetal dolaşım içine girebilir ve bu nedenle kimerikliğin doğuştan kimerik olduğu söylenir.
Kan transfüzyonu / kemik iliği nakli / fetal doku nakli yoluyla, hastaya genetik olarak başka bir bireyden hücreler verilir ve kimerizmin edindiği kimerizm olduğu söylenir. Lenfoid kimerik hücrelerin varlığı ve orijini karyotipleme / HL A tiplemesi / diğer antijen tiplemesi ve yüksek polimorfik markörlerin analizi ile tespit edilebilir.
O. Özel Araştırmalar:
ben. Adenosin deaminaz (ADA) ve pürin nükleosid fosfataz (PNP) enzim düzeyleri, SCID ve T hücre eksiklikleri olduğundan şüphelenilen tüm hastalarda tespit edilmelidir.
ii. Serum alfa fetoprotein düzeyi, ataksi-telanjiektazi hastalarını diğer nörolojik hastalıkları olan hastalardan ayırmada yararlı olabilir. Ataksi-telanjiektazi hastalarının en az yüzde 95'inde serum alfa-fetoprotein düzeyi (40-2000 mg / L) artmıştır.
iii. SCID hastalarının kan mononükleer hücreleri, MHC sınıf II moleküllerinin varlığı açısından incelenmelidir (MHC sınıf II eksikliği olasılığını dışlamak için).
iv. Sitogenik analiz, ataksi- telanjiektazi ve diğer kromozomal kırılma sendromunun tanısında faydalıdır.
v. Moleküler sitogenetik çalışmalar, DiGeorge sendromunun tanısında ve diğer durumlarda bilgilendirici olarak yardımcıdır.
vi. Gen ürünlerinin moleküler düzeyde analizi ve gen ürünlerinin tanıtımı.
P. Bulaşıcı Ajanların İzolasyonu ve Tanımlanması:
İmmün yetmezliği olan hastalarda, antikor tespiti ile viral enfeksiyonların teşhisi, değeri düşüktür veya hiç yoktur, çünkü bunların antikor üretimi kendisi kusurludur. Bu nedenle virüsün izolasyonu ve tanımlanması esastır. Virüs genomunu tanımlamak için viral kültür yöntemleri veya PCR yöntemi ile doğrudan viral izolasyon gereklidir. BOS kültürleri, merkezi sinir sisteminin enfeksiyonundan şüphelenildiği durumlarda önemlidir. Bronşiyal lavaj, Pnumocystis carinii ve diğer solunum patojenlerinin tanısında yararlı olabilir. HIV enfeksiyonu western blot ve HIV için PCR testleri ile ekarte edilmelidir.
S. Prenatal Tanı (yani, Çocuğun Doğumundan Önce Tanı):
Prenatal tanı fetal kan örneği, amniyon hücreleri ve koryonik villus biyopsisinden yapılabilir.
ben. Fetüsün göbek kordon kanında T veya B hücrelerinin yokluğu, sırasıyla SCID ve X'e bağlı agamaglobülineminin prenatal tanısı için kullanılabilir. Mümkün olduğunda doğum öncesi tanıya moleküler testler eşlik etmelidir.
ii. Fetal kan hücreleri üzerinde MHC sınıf II molekülleri ve CD18 gibi hücre zarı bileşenlerinin olmaması, sırasıyla MHC sınıf II eksikliği ve lökosit adezyon eksikliği tip 1'i tanımlayabilir.
iii. Fetusta ADA eksikliği ve PNP eksikliği, koryonik villik veya fetal kan örneklerinden teşhis edilebilir.
R. Genetik Taşıyıcı Tespiti:
Çeşitli immün yetmezlik hastalıklarının tam olarak haritalandırılmasındaki son gelişmeler ve yüksek polimorfik belirteçlerin mevcudiyeti, taşıyıcı tespitinde ve doğum öncesi tanıda yardımcı olmaktadır.
ben. Gen konumunun makul bir şekilde tanımlandığı yerlerde, polimorfik markerler, bilgilendirici ailelerde, makul kesinlikte taşıyıcıları tanımlayabilir.
ii. Spesifik enzim veya tamamlayıcı bileşen eksikliği tanımlanırsa, ailedeki heterojen taşıyıcılar, enzimin düşük seviyesinden veya söz konusu tamamlayıcı bileşenden tespit edilebilir.
