Glukoz Kullanma Yeteneklerini Bulmak İçin Bakterilerde Yükseltgenme-Fermentasyon Testi (Şekil ile)

Bakteriler üzerinde oksidasyon-fermantasyon testi aerobik (oksidatif) veya anaerobik (fermentatif) glikoz kullanma yeteneklerini bulmak için test!

Prensip:

Bazı bakteriler glukoz kullanma yeteneğine sahiptir. Bazıları onu yalnızca oksijen varlığında kullanır (diğer yandan aerobik olarak öküz), diğerleri ise aerobik kullanımının yanı sıra oksijen yokluğunda da (fermentativ veya anaerobik olarak) kullanabilirler.

Bu nedenle, glikozu mayalayabilen bir bakteri onu okside edebilmelidir, ancak glikozu okside edebilen bir bakteri onu mayalayamayabilir. Her iki şekilde de glukoz kullanılırsa, bromocresol morunun rengini mordan sarıya değiştiren pH'ı düşüren asit üretilir.

Oksidasyon-fermentasyon testinde (O / F Testi) test bakterileri, glukoz ve bromosresol mor içeren yarı katı agar tüplerinde ayrı ayrı aerobik ve anaerobik olarak büyütülür. Bakteriler glikoz kullanma yeteneğine sahipse, ortamın rengi mordan sarıya değişir. Aerobik olarak glikoz kullanıyorsa oksidatiftir ve anaerobik olarak glikoz kullanırsa fermentatiftir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, Hugh-Leif-oğlu glikoz suyu, sıvı parafin, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Hugh-Leifson glikoz et suyu besiyeri (HLGB) (ana bileşen olarak mor glikoz ve bromokresol içeren) veya 100 ml suyu için gereken hazır toz içeriği, 100 ml distile su içinde tartılır ve çözündürülür. Çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik konik bir şişe (Şekil 7.9).

2. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 7.4'e ayarlanır.

3. pH ayarlandıktan sonra agar eklenir. Burada, bıçağın kolaylaştırılması için yarı katı bir ortam elde etmek için daha az agar kullanılır.

4. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

5. Katılaşmadan önce, sıcak erimiş haldeki ortam iki test tüpü grubuna dağıtılır (her biri yaklaşık 5 mi); her set beş test tüpüne sahiptir.

6. Test tüpleri koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

7. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

8. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

9. Sıvı parafin, sıcak hava fırınında 3 saat boyunca 180 ° C'de ısıtılarak sterilize edilir.

10. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminar akış odasında, tüm sterilize edilmiş yarı katı broth tüplerine, alevle sterilize edilmiş bir aşılama döngüsü yardımıyla bıçaklanarak inoküle edilir. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

11. Sterilize edilmiş sıvı parafin, anaerobik durumu sağlamak için hafifçe aseptik olarak bir inoküle edilmiş tüp setine (ortamın yaklaşık 1 cm yüksekliğinde) dökülür.

12. Tüm aşılanmış et suyu tüpleri, bir inkübatörde 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.