İleri Akış Sitometrisi ile ilgili Çalışma Notları

Aşağıda belirtilen makale, ileri akış sitometrisi hakkında çalışma notları sunar.

Akış sitometrisi, son 20 yılda özellikle nükleer paketleme verimi olmak üzere hücre içeriğini incelemek için geliştirilen en yeni tekniktir. NPE'ye ek olarak, çeşitli hücrelerin içeriğinin ve patolojik koşulların fiziksel ve kimyasal özellikleri doğru sonuç ile hızla analiz edilebilir.

Akış sitometreleri piyasada bir makine şeklinde mevcuttur. Makine, lazerden geçen hücreler olarak üretilen ışık sinyallerini toplamak için bir optik sistem olan sıvı sisteminden oluşur. Makine ayrıca, ışık sinyallerini nihayetinde bilgisayar analizi için sayısallaştırılmış olan orantılı elektronik sinyale dönüştüren elektronik sistem ile donatılmıştır.

Saniyede yaklaşık 5000 hücre, birbiri ardına bireysel olarak ölçülen, heterojen popülasyonun süspansiyonundan taranabilir.

Gelişmiş tasarıma sahip Fludics Sistemi, lazerler, optikler, elektronik parçalar ve sıralama ile donatılmıştır. Fludics sistemi, Floresans Aktif Hücre Sıralayıcısı'na (FACS Calibur sıvıları sistemi) sahiptir, sıralama sırasında tek hücre sayım hassasiyetini sıralayabilir.

Sonuç, Tek hücre ve Kurtarma arasında kalan toparlanma ile yüksek saflıktır. PRIME, STAND BY ve RUN çalışma modlarını seçmek için üç düğmeyle elektronik olarak kontrol edilmiştir. Hız kontrol olarak yüksek; (60ul / dak.), Orta (35 ul / dak) ve Düşük (12 ul / dak).

Uyarma ve emisyon, florokromlar, filtreler ve renk dengeleme ekipmanın önemli parçalarıdır. 530/30 BP filtresi, Floresan İzotiyosiyanat (Leke) tarafından yayılan sinyalleri ölçer. Ficoerythrin ve Popidium Iodide kullanılırsa, 585/42 BP filtresi kullanılır. Peridinin Klorofil ve 7-Amino-Actinomycin D Sinyali üretilirse, 650 LP filtre kullanılır.

Lazer sinyalleri Becton Dickinson hücre arayışı yazılımı tarafından okunur. Floresan detektörü ve bant filtreleri, cihazın talimatına ve ihtiyacına göre ayarlanmalıdır. Ekipmanda 488 nm Argon lazer ışık kaynakları ve 623 nm bant geçiş filtresi yaygın olarak bulunur.

Ayrıca veriyi ve analizini görüntülemek için bir sisteme sahip. Önemli parametreler histogramlar, çok parametreli veriler ve liste modu verileri ve yolluktur. Verilen yazılım yardımıyla verilerin makine analizi ve bilgisayarda otomatik olarak görüntülenen sayıya karşı DNA içeriğinin histogramlarını vermesi (49.2).

Akış sitometresinin uygulamaları çoktur ve biyolojik araştırmalar ve birçok insan hastalığında klinik araştırmalar için bir nimettir. Akış sitometresi, hava soluyan balıkların baş böbrek hücrelerinde hemopoitik dokudaki kan soylarının incelenmesi için kullanılır.

Pluripotent hematopoetik kök hücre ve olgun fonksiyonel, periferal lenfosit popülasyonunun fenotipi arasında ayrım yapmak kolay olabilir. Bu ekipmanın önemli kullanımı apoptoz veya hücre ölümünü incelemek ve ayrıca pestisit toksisitesine bağlı olarak hücre nekrozunu incelemektir.

Geniş açılı saçılma sinyalleri nedeniyle, lenfositleri, monositleri ve granülositleri çözünmüş tam kan numunesinden çözmek mümkündür. Trombositleri arka plan gürültüsünden ayırmak da mümkündür. İmmün sistemde ve immünofenotiplemede kullanılır. Lösemi ve lenfoma, transplantasyon araştırması, retikülosit sayımı ve hücresel DNA içeriğinin analizini incelemek için kullanılır.

Darbe işleme mekanizması nedeniyle, DNA hücre döngüsü analizinde avantajlıdır. NPE analizi, primer meme kanseri ve metastazı, primer kolon kanseri ve kolon metastazı ile mide ve yumurtalık kanserini ayırt etmek için kullanılır (Şekil 49.2).

Kullanılan protokol, ilk hücrelerin% 3'lük paraformaldehid içinde çıkarılmış ve sabitlenmiş olmasıdır. % 0.5 Triton x 100 ile geçirgenleştirilirler. Nükleer DNA daha sonra, döngü Test Plus DNA kiti kullanılarak RNase işleminden sonra popidium iyodür ile etiketlendi.