Situ Hibridizasyonunda Floresan (FISH)

Bu yazıda Situ Hibridizasyonunda (FISH) Floresan hakkında tartışacağız.

Belirli bir DNA segmentinin kaç kopyasının bir hücrede bulunduğunu belirlemek için kullanılan bir laboratuvar tekniğidir. Sitolojik preparatlarda spesifik kromozomal bölgeleri tanımlar. Laboratuarda, bir DNA segmenti kimyasal olarak değiştirilmiş veya floresan boya tarafından boyanmış ve floresan mikroskobu altında incelendiğinde çok parlak renkli floresan görünüyor.

Floresan in situ hibridizasyon, kromozom analizinin duyarlılığını, özgüllüğünü ve çözünürlüğünü büyük ölçüde artırdı.

Bu tekniğin avantajları çoktur, ancak bazıları aşağıda belirtilmiştir:

(1) Bu yöntemin çözünürlüğü, geleneksel kromozom bantlarından ve yaklaşık 2 mega baz (Mb) uzunluğundan daha iyidir.

(2) Bu tekniğin protokolü kolaydır ve hem bölünen hücrelerin yanı sıra hem de bölünmeyen hücrelere uygulanabilir. Bu teknik, silme, çoğaltma, aneuploidi ve türev kromozomların varlığı gibi bir dizi mutasyon tanımlayabilir. Bu teknik ayrıca kemik iliği nakli hastalarında tekrarlayan veya kalıntı hastalıkları izlemek için yaygın olarak kullanılır.

FISH (Situ Hibridizasyonunda Floresan) genellikle hem kromozomal analiz için hem de spesifik translokasyon ve silme tanımlaması için uyarılmış periferik kan üzerinde gerçekleştirilir. Örneğin, kromozom 9 ve 22 arasındaki translokasyon tarafından oluşturulan Philadelphia kromozomunu (Ph1) göstermek için kullanılır ve kronik bir miyeloid lösemiye (KML) neden olur.

Burkitt lenfomasına neden olan kromozom 8 ve 14 arasındaki ve B-hücreli lösemi ile sonuçlanan kromozom 18 ve 14 arasındaki translokasyonun tanımlanmasında da kullanılır. Ayrıca Down Sendromu tanısı için kullanılır.

FISH prosedüründe, hücre kültürleri hazırlanabilir. Metafaz / prometafaz kromozomları, cam bir lam üzerine sabitlenir. Ek olarak, FISH, faz içi çekirdeklerin analizi için değiştirilebilir. Sonra, kromozomlar denatüre edilir; etiketli bir DNA sondası daha sonra sokulur ve daha sonra sonda, slayttaki kromozoma hibridize edilir. Bu nedenle, 'in situ' hibridizasyon terimi verilir.

DNA probları flüorokrom ile işaretlenmiştir, bu prob flüoresan sinyali verir ve flüoresan mikroskopisi ile görülebilir. Floresans, floresan mikroskobuna eklenen filtrelerin yardımı ile çıkarılabilir.

FISH problarının uzunluğu yaklaşık 40 kilo bazdır (kb) ve bir kromozom çiftinin her bir üyesi üzerinde çift flüoresan sinyali olarak algılanır. Çift nokta, iki hizalı kardeş kromatitin her birinden gelen sinyallere karşılık gelir.

Basit uygulamasında, bu tür herhangi bir sonda için normal bir FISH modeli, normal olarak eşleştirilmiş kromozomların her bir üyesi için bir set olmak üzere iki çift nokta seti olacaktır. Bu çift noktalar genellikle bir sinyal oluşturmak için birleşir. Söz konusu kromozomal bölge için monozom hücreler, çekirdek başına sadece bir çift nokta dizisi gösterirken trisomik hücreler üç çift nokta dizisi gösterecektir.