İnsan Genom Projesinde Kullanılan Teknikler

İnsan genom projesinde kullanılan önemli tekniklerden bazıları şunlardır:

(а) DNA Sıralaması, bir DNA molekülündeki nükleotit bazlarının (adenin, guanin, sitozin ve timin) sırasını belirlemek için kullanılan sekanslama metodlarıdır. DNA'yı belirli bazlarda parçalara ayırmak için kimyasalları kullanan Maxam Gilbert tekniği olarak adlandırılan iki yaygın yöntem vardır; veya en yaygın olarak Sanger tekniği.

Aynı zamanda dideoksi veya zincir sonlandırma yöntemi olarak da adlandırılır. Yeni DNA zincirleri yapmak için DNA polimerazını, dideoksinükleotitlerin zincir sonlandırıcılar varlığında, zinciri büyüdükçe rasgele durdurmak için kullanılır. Her iki durumda da, DNA fragmanları uzunluğa göre poliakrilamid jel elektroforezi ile ayrılır. Bu, dizinin doğrudan jelden okunmasını sağlar.

(b) Kısıtlama Parçası Uzunluğu Polimorfizmlerinin (RFLP) istihdamı.

(c) Maya Yapay Kromozomları (YAC), DNA parçalarını klonlamak için laboratuvarda oluşturulan ve kullanılan bir vektördür (taşıyıcı). Bir YAC, maya hücrelerinde replikasyon için gerekli olan telomerik, centromerik ve replikasyon orijinli sekanslardan oluşturulur. Telomer, kromozomun sonu; centromere, iğ liflerinin hücre bölünmesi sırasında bağlandığı kromozom bölgesidir; ve replikasyon orijinli sekanslar, DNA replikasyonunun başladığı noktalardır.

(d) Bakteriyel Yapay Kromozomlar (BAC), bakterilere klonlanan başka bir türden büyük bir DNA (100.000 - 200.000 bp) segmentidir. Yabancı DNA, konukçu bakterilere klonlandıktan sonra, birçok kopya yapılabilir. Klonlanmış DNA'nın büyük bölümlerini, tipik olarak yaklaşık 150 kb'yi tutabilen büyük bir klonlama vektörüdür. BAC'ler, Escherichia coli'nin laboratuar suşlarında çoğaltılabilir. Bu vektörler, genom ölçeği sıralama projeleri için genomik kütüphanelerin yapımında yardımcı olur.

(e) Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR).

(f) Elektroforez.